产品货号：
BTN111201
中文名称：
痰液DNA提取试剂盒
英文名称：
Sputum DNA extraction kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒专用于从痰液或其他上呼吸道分泌样品中纯化DNA，用于后续的分子生物学分析。
保存：常温，有效期一年。
一、痰标本的获取与保存
注意：痰液以及下列操作的废弃液都可能含有致病性的结核杆菌等致病菌，需按传染源相关规定流程进行操作
二、DNA提取
相关搜索：痰液DNA提取试剂盒，痰液DNA纯化试剂盒，Sputum DNA extraction kit
- 每次可以处理10～20mL痰液，得到2～5μg DNA。
- 纯度高，可直接用于后续得PCR检测。
- 一管式操作，减少污染，节约成本。
- 含痰液保存液（溶液A），便于取样和运输。
- 无毒环保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
| 组分 | 规格 |
| 溶液A（痰液细胞固定液） | 2×250mL |
| 溶液B（痰液解稠剂） | 2×250mL |
| 溶液C | 30mL |
保存：常温，有效期一年。
一、痰标本的获取与保存
注意：痰液以及下列操作的废弃液都可能含有致病性的结核杆菌等致病菌，需按传染源相关规定流程进行操作
- 每例患者在常规痰标本采样时，最好连续三天采集三次样品以防误差。具体做法是先在每个50mL的痰液收集管内新鲜加入10mL溶液A和10mL溶液B，待患者晨起漱口后，咳深部痰7～8口（约10～20mL），收集到装有溶液A和溶液B混合液的痰液管收集内，混匀后储于4℃冰箱或阴凉处。第二、三天重复此操作。取足三管后一起送实验室，4℃冰箱保存直到使用。
- 使用时，在室温反复振摇装有样品（总体积约30～40mL）的痰液收集管5～10分钟，充分混匀直到痰液中无粘稠痰块而呈均匀的液相。
- 4℃2500g离心5分钟，弃上清。
- 沉淀再用自备的PBS液洗两遍。
- 所得沉淀可以直接用于涂片，用于比较细胞形态学分析。也可以将细胞沉淀在0.2mL PBS缓冲液中重悬后转入1.5mL螺旋盖塑料离心管，-20℃冰箱长期保存，或立即用于下步的DNA提取。为避免盖子崩开而出现交叉污染或痰液的分枝杆菌污染环境，建议不要使用压盖式塑料离心管。同时最好设置一个阳性和一个阴性对照。
二、DNA提取
- 在上步所得的0.2mL样品中加入0.6mL溶液C。溶液C容易形成沉淀，用前需37℃加热融化并摇晃均匀。
- 室温放置10分钟。此间可以在每个管外壁上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。
- 振荡数秒后加入0.7mL自备的异丙醇，旋紧盖后振荡30秒混匀。
- 把离心管的向心面对向转头，13000～15000g室温离心至少15分钟。
- 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的DNA沉淀（此时可能看不见）。
- 加入1.0mL 70%乙醇，振荡数秒后15000g室温离心5分钟。
注意：在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。 - 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的DNA沉淀（此时呈膜状沉淀）。
- 将离心管放回离心机再短暂离心数秒，然后用移液器移弃约50μL残留液体（70%乙醇），否则它会影响后续反应。
- 加入200μL RNase-free水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状DNA沉淀，溶液将呈混浊状，含少量不溶，短暂离心后存上清（含DNA）。
- 直接取适量用于PCR，样品使用量不超过PCR体系的1/2。剩余DNA样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。
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